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多巴胺試劑盒檢測步驟都有哪些?
   多巴胺試劑盒可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測,可手動(dòng)操作,也可自動(dòng)操作。進(jìn)一步的研究表明:此試劑盒還可用于組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的研究。
  多巴胺試劑盒檢測步驟
  1、在一次性試管內(nèi),用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控品和尿液樣本(如:10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液)
  2、在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液,輕輕振蕩。
  3、將預(yù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控品和尿液樣本加100ul至相應(yīng)孔內(nèi)血漿樣本直接加100ul于相應(yīng)孔內(nèi)在此步驟中,將槍頭直接觸碰COMT酶溶液,顏色會(huì)轉(zhuǎn)為粉紅色,輕輕混勻。
  4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。
  5、蓋板。在振蕩器(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育120min
  6、棄去孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
  7、每孔加入100μL酶聯(lián)物
  8、蓋板。在軌道搖床(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育60min
  9、棄去孔內(nèi)反應(yīng)液,用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
  10、加底物液和終止液時(shí),其時(shí)間間隔應(yīng)相同
  11、每孔加入200μL底物液
  12、在軌道搖床(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育40min。如果自動(dòng)操作時(shí)的溫度超過25℃時(shí),則應(yīng)相應(yīng)的將溫育時(shí)間縮短至30min。
  13、每孔加入50μL PNPP終止液以終止底物反應(yīng),輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。
  14、加終止液后60min之內(nèi)405nm處讀取OD值。(參考波長:620-650nm)
  多巴胺試劑盒實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集必修課:
  1)標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  2)血清:使用不含熱原的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  3)血漿:3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
  4)細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  5)組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
  6)保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  多巴胺試劑盒不做任何有損顧客利益的事情,經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系,優(yōu)秀的科研隊(duì)伍,先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,是您可靠的合作伙伴,*質(zhì)量有保證,帶給您Z滿意的實(shí)驗(yàn)效果。
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